Развитие молекулярно-генетической биологии привело к созданию точных методик, позволяющих установить биологическое родство. В основе генетического исследования лежит сравнительный анализ материального носителя наследственности – дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК).
При оплодотворении происходит слияние геномов яйцеклетки и сперматозоида в результате чего образуется генотип нового организма. ДНК отца и матери в равной степени составляет геном ребенка. Гены – функциональные единицы наследственности – существуют в одной из форм – аллелей. Аллели отличаются последовательностью расположения нуклеотидов, что передается по наследству.
Тот факт, что все клетки, сформировавшие новый организм, содержат одинаковую ДНК – наполовину матери, наполовину отца – и позволяют определять степень родства тестируемых лиц. Для этого изучаются короткие участки ДНК – локусы, которые повторяются с определенной очередностью. Они носят название ДНК-маркеров. Комбинация из ДНК-маркеров составляет генетический профиль человека.
Методика проведения ДНК-анализа.
Стандартным материалом для генетической экспертизы является защечный эпителий, полученный при помощи мазка. Кроме того, выделить ДНК можно из любого биологического материала человека: крови, слюны, волос, ногтей, спермы, мочи.
- I этап – получение очищенной молекулы ДНК из биоматериала ребенка и возможного отца.
- II этап – определение фрагментов (локусов), наиболее подходящих для исследования.
- III этап – копирование ДНК-фрагментов в ходе полимеразной цепной реакции (ПЦР).
- IV этап – сравнение локусов ребенка и предполагаемого отца.
Цель исследования – нахождение совпадений каждого фрагмента (локуса) ребенка с таким же фрагментом у предполагаемого отца. Так как такие фрагменты могут встречаться и у других мужчин в популяции, для точности результатов необходимо наличие данных о частоте встречающихся аллелей.
Для установления отцовства проводится математический анализ вероятности совпадения аллелей ребенка и вероятного отца.
Официально в России принято, что при показателе вероятности выше 99,9% отцовство считается доказанным.
Стандартный анализ на установление отцовства осуществляют по 25 генетическим маркерам. При расширении панели тестируемых маркеров повышается и точность производимого анализа.
Генетические маркеры, используемые при анализе ДНК, должны обладать высокой полиморфностью, то есть иметь не 2 аллели (варианта), а значительно больше до 10 и более. На точность результатов генетической экспертизы также влияет количество тестируемых локусов и природа локуса.
Расширенный анализ 25-40 локусов проводят: ·
- Если на отцовство тестируются несколько мужчин, состоящих в кровном родстве. У них генетический материал содержит большее количество одинаковых аллелей, чем в популяции. Поэтому для более точной идентификации, необходимо изучение дополнительных локусов.
- Если в результате мутации в генетическом профиле не совпадает одни локус, то при исследовании 16 локусов процент вероятности отцовства достигнет всего 95%, что не является достаточным доказательством биологического родства. Только увеличение количества ДНК-маркеров в тестировании (до 40) позволит повысить этот процент до необходимых 99,9%.
При установлении родства специалисты при положительном результате указывают, что родство не может быть исключено. При отрицательных результатах заключение носит более категорический характер: родство исключено.
Незначительное отклонение от 100% при определении вероятности отцовства объясняется тем, что не исключается теоретическая возможность существования в мире человека с таким же генетическим профилем, как и у тестируемого мужчины.